黃曲霉毒素，英文縮寫AFT，是二呋喃環(huán)和香豆素（氧雜萘鄰?fù)┙M成的化合物，由黃曲霉、寄生曲霉等菌株產(chǎn)生，分子量為312～346，熔點(diǎn)為200～300℃，具有穩(wěn)定、耐高溫特性，可于長(zhǎng)波紫外光下產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光顏色、RF值及結(jié)構(gòu)不同等分為B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、R1、GM、毒醇。
AFT難溶于水、乙烷、乙醚和石油醚，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙腈和二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑。AFT可在PH1～3的酸性溶劑中稍分解，PH9～10溶液中迅速分解破壞，遇堿可迅速分解，在PH9～10堿性溶液中可分解為幾乎無毒的鹽，可在酸性條件下還原。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
黃曲霉素是泛指一些由真菌產(chǎn)生的強(qiáng)毒性致癌類物質(zhì)，短期攝入高劑量（1㎎/kg體重）可導(dǎo)致急性中毒，常見發(fā)熱、嘔吐、黃疸等肝功能異常癥狀或肝壞死，長(zhǎng)期低劑量（20微克/千克體重）暴露會(huì)顯著增加肝癌、胃癌等患病風(fēng)險(xiǎn)，因其廣泛存在于農(nóng)作物與食物中，并對(duì)人體和動(dòng)物危害巨大，故而建立快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法對(duì)保障食品安全與公共健康具有重要意義。
本實(shí)驗(yàn)旨在通過固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理，即酶聯(lián)免疫法，限量、定量測(cè)定樣品中黃曲霉毒素B1的含量，為食品污染風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)儀器
①ST-2000A 霉菌毒素測(cè)定儀
②玉米、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）、微量移液器、甲醇、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷試劑
實(shí)驗(yàn)步驟
①檢查實(shí)驗(yàn)所用器材，確保其干凈干燥無污染
②甲醇、去離子水以7：3比例配取樣品提取液
③取粉碎玉米樣品2g，放于50ml離心管，加5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，結(jié)束后取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水，混勻
④將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min，搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，并用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
⑤將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。
⑥揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干
⑦每孔加入底物液A（50μl），再加底物液B（50μl），振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。
⑧每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
⑨用黃曲霉素測(cè)定儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成
⑩儀器完成測(cè)定，自動(dòng)給出結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
經(jīng)檢測(cè)，該樣品的黃曲霉毒素約為0.19ug/kg，滿足GB 2761-2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》標(biāo)準(zhǔn)。
